1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
商品描述：
產(chǎn)品名稱 | NCI-H661 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | 規(guī)格 | 1*125ml/500ml |
用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) | 貨號(hào) | EY-XP5746 |
NCI-H661 細(xì)胞專用培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持NCI-H661細(xì)胞良好的生長狀態(tài)。
本產(chǎn)品中已包含 NCI-H661 細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于NCI-H661 細(xì)胞的培養(yǎng)。
產(chǎn)品主要成分
RPMI-1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 445 ml
特級(jí)胎牛血清 50 mL
P/S青霉su-鏈霉su 5 mL
運(yùn)輸和保存
運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸
保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；-20℃，避光，保存6個(gè)月。
質(zhì)量控制
檢測項(xiàng)目 | 質(zhì)量控制 |
澄清度 | 澄清 |
PH | 7.3±0.2 |
內(nèi)毒素含量 (EU/mL) | ≤10 |
無菌檢測 | 細(xì)菌 | 陰性 |
真菌 | 陰性 |
支原體 | 陰性 |
細(xì)胞生長試驗(yàn) | 細(xì)胞形態(tài) | 正常 |
細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn) | 合格 |
注意事項(xiàng)：
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
公司正在出售的產(chǎn)品：
T2 (174xcem.T2 )人淋巴母細(xì)胞 | M-1 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
小鼠黑色素瘤帶綠色熒光B16+GFP（種屬鑒定） | SDOW-17小鼠雜交瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞IMR-32(STR鑒定正確) | Sp2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
中國倉鼠卵巢細(xì)胞CHO（種屬鑒定） | Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人卵巢癌腺癌細(xì)胞 NIH:OVCAR-8(STR鑒定正確) | STC-1小鼠小腸內(nèi)分泌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
大鼠腦I型星形膠質(zhì)細(xì)胞 CTX-TNA2（種屬鑒定） | SV40-MES-13小鼠腎小球系膜細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
昆蟲卵巢細(xì)胞Sf9（種屬鑒定） | SVEC4-小鼠淋巴結(jié)血管上皮樣 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
小鼠乳腺癌細(xì)胞 E0771（種屬鑒定） | TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人食管鱗狀細(xì)胞癌COLO-680N(STR鑒定正確) | TCMK-1小鼠腎小管上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)PC-12（種屬鑒定） | TM3小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人乳腺腺癌細(xì)胞MDA-MB-415(STR鑒定正確) | TM4正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞WSU-DLCL-2(STR鑒定正確) | U14小鼠子宮頸癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人鼻腔上皮細(xì)胞RPMI 2650 (STR鑒定正確) | YAC-1小鼠淋巴瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
大鼠肝細(xì)胞BRL（種屬鑒定） | 9L/lacZ大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞帶熒光素酶C6+LUC(種屬鑒定) | A7r5大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
點(diǎn)擊放大
會(huì)員_a.png)